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厌氧菌的分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段

发布时间:2021-07-07      点击次数:734
  厌氧菌的分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段,其中初代培养相对比较困难,的问题就是厌氧环境和培养基的选择。
  初代培养的一般原则是:
  (1)先将标本涂片染色直接镜检,指导培养基的选择。
  (2)尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。
  (3)好多选1~2种覆盖面不同的选择性培养基。
  (4)尽量保证培养基新鲜。
  (5)要考虑到微需氧菌存在的可能。
  1.选用适当的培养基接种:应接种固体和液体两种培养基;
  (1)培养基的使用,应注意下列各点:
  1)尽量使用新鲜培养基,2~4h内用完;
  2)应使用预还原培养基,预还原24~48h更好;
  3)可采用预还原灭菌法制作的培养基(用前于培养基中加入还原剂,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等,尽可能使预还原剂处于还原状态);
  4)液体培养基应煮沸10min,以驱除溶解氧,并迅速冷却,立即接种;
  5)培养厌氧菌的培养基均应营养丰富,并加有还原剂与生长刺激因子(血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等)。
  (2)培养基的选择:初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。
  1)非选择培养基:本培养基使分离的厌氧菌不被抑制,几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。
  2)选择培养基:为有目的选择常见厌氧菌株,以便尽快确定厌氧的种类。
  2.每份标本少接种3个血平板,分别置于有氧,无氧及5%~10à2环境中培养,以便正确地培养出病原菌,从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。
  3.厌氧培养法
  (1)厌氧罐培养法。
  (2)气袋法。
  (3)气体喷射法:又称转管法。
  (4)厌氧手套箱培养法:是迄今厌氧菌培养的佳仪器之一。
  (5)其他培养法:平板焦性没食子酸法医学教育网搜集|整理;生物耗氧法;高层琼脂培养法。
  4.厌氧状态的指示:美蓝和刃天青。无氧时均呈白色,有氧时美蓝呈蓝色,刃天青呈粉红色。
  5.分离培养厌氧菌失败的原因:①培养前未直接涂片和染色镜检;②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长;③未用新鲜配制的培养基;④未用选择培养基;⑤培养基未加必要的补充物质;⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为厌氧菌培养基;⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气;⑧催化剂失活;⑨培养时间不足;⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。
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